Auflösung von Untereinheiten von Thrombin wie dem Enzym Agapurin aus dem Gift von Agkistrodon halys und Sequenzierung von Aminosäureresten

[Zusammenfassung] Ziel Bestimmung der 15 N-terminalen Aminosäurereste von zwei ähnlichen Untereinheiten von Agacutin.Die beiden Untereinheiten des Enzymmoleküls müssen gespalten werden, um die einzelne Peptidkette der Untereinheit zu erhalten, und sequenziert werden.Methoden Hochgereinigtes Agacutin wurde durch ein biochemisches Verfahren erhalten.Einzelne Untereinheitsproben zur Identifizierung und Sequenzierung wurden durch SDS-PAGE-Elektrophorese-Trennung, Rückgewinnung von Untereinheit-Klebestreifen und PVDF-Membran-Elektrotransfertechnologie hergestellt.Letztere bestimmte 15 Aminosäurereste am N-Terminus der Untereinheit durch das Edman-Abbauverfahren.Ergebnisse Die Sequenz der großen Untereinheit (16 kDa) war DCSSGWSSYEEHQYY, und die der kleinen Untereinheit (15 kDa) war DSSGWSSYEGHEYYV.Schlussfolgerung Die Sequenzierungsergebnisse zeigten, dass Agacutin ein neues Schlangengift-Thrombin-ähnliches Enzym war, indem die NCBI-Datenbank durchsucht wurde.